叶酸是一种重要的B族维生素,若人体内叶酸不足会引起巨红细胞贫血、精神科疾病、心脏病、癌症、胃肠功能异常和中风。由于叶酸是细胞繁殖中生成必要的DNA所不可少的物质,孕妇缺乏叶酸会造成胎儿神经管畸形、孕妇先兆子痫、胎盘早剥发生率增高。
叶酸广泛存在于各种动植物食品中,但天然食品所含叶酸大部分含量不高,以多谷氨酸叶酸形式存在,吸收率不高,且叶酸在人体内停留时间不长,人们通常在食品中强化吸收率高的单谷氨酸盐形式叶酸。美国1998年1月1日起已强制在某些谷物食品中强化叶酸,FDA规定每1千克谷物食品强化1.4mg叶酸。我国已在婴幼儿、孕妇、老年食品中强化叶酸。目前叶酸含量测定方法有:微生物法、放射免疫法、气质联用法等，经典的微生物法操作繁琐，易受广谱抗生素的影响，属半定量法，放射免疫法测定值易偏高，且操作质控要求较严，不能有效区分同效维生素。本法利用叶酸经氧化剂氧化后具有荧光特性，采用柱后衍生荧光检测器测定，大大提高了检测叶酸的灵敏度(较紫外检测提高了2个数量级),避免了使用离子对试剂伤害柱子且能够准确定量。
液相柱后衍生法在婴幼儿食品叶酸测定中的应用：
采用反相高效液相法,选用含12乙腈+880.05mmol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3.5)作为流动相,流速1ml/min,经ODSC-18反相色谱柱分离,柱温设为40℃,以0.5过二硫酸钾溶液为衍生剂,流速为0.3ml/min,反应温度为60℃,使用荧光检测器检测定量,激发波长为365nm,发射波长为450nm,外标法测定叶酸含量。结果:本法测定线性范围能达到40～500μg/L,相关系数为0.9992,低定量检测限为28.72μg/L,平均回收率能达到86.6～96.0,相对标准偏差为1.5。结论:本方法简单、快捷、灵敏,满足日常分析要求。
